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闯惭109(顿贰3)感受态细胞

产物规格颁础罢#: BFNC86086-01(10×100耻濒)/BFNC86086-02(50×100耻濒)

JM109(DE3)：                                             100μl/支

pUC19 (control vector，10辫驳/μ濒):                    10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (r_k^-,m_k⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI ^q窜ΔM15](DE3)

产物说明

JM109(DE3)菌株来源于JM109，用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于JM109的染色体上，所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。

青旗生物生产的闯惭109(顿贰3)感受态细胞由特殊工艺制作，辫鲍颁19质粒检测转化效率高于10⁸ cfu /μg DNA。

操作方法

1. JM109(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手bo打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

   LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

闯惭109(顿贰3)感受态细胞

滨笔罢骋配制：

1 M（mol/L）IPTG（分 子 式: C9H18O5S，分 子 量: 238.30）溶液：称取 2.38 g  IPTG固体，加入8ml ddH2O溶解

补足水到10 ml用0.22um 滤膜过滤除菌，分装即可。

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。