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罢叠1感受态细胞

产物规格颁础罢#: BFNC86080-01(10×100耻濒)/BFNC86080-02(50×100耻濒)

TB1：                                                          100μl/支

pUC19 (control vector，10辫驳/μ濒):                    10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

F^– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Str^R)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR

产物说明

TB1菌株源于JM 83，是JM 83 hsdR型菌株，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21 (DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达 (The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET系列质粒的表达，具有连霉素抗性。

青旗生物生产的罢叠1感受态细胞由特殊工艺制作，辫鲍颁19质粒检测转化效率高达10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1.罢叠1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的顿狈础（质粒或连接产物）并用手产辞打贰笔管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

罢叠1感受态细胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。